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 二氧化碳培養箱選購常識

1、為什么培養的細胞要及時傳代？

   體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長。當細胞鋪滿培養器皿的表面時，正常的細胞停止生長，但是轉化（即發生遺傳物質突變）的對接觸抑制不敏感的細胞會繼續生長。如果不及時傳代，這些轉化的細胞就會逐步取代正常的細胞。

2、為什么大多數細胞培養需要用二氧化碳培養箱？

   一般細胞培養液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統是一種生理pH緩沖系統（它是人體血液中最重要的pH緩沖系統），大多數培養液用它來保持穩定的pH。用粉末配制培養液時，常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。

   對大多數以碳酸鹽作為pH緩沖系統的培養液而言，以為了維持穩定的pH，培養箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以保持培養液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。

   是不是采用其他pH緩沖系統就不需要二氧化碳培養箱了呢？人們發現由于空氣中的二氧化碳濃度很低，如果細胞不在二氧化碳培養箱中培養，培養液中的HCO3-會被耗盡，這樣會影響細胞的正常生長。所以大部分動物細胞的培養，還是需要二氧化碳培養箱。

   細胞培養液中常附加其他的pH緩沖系統，比如HEPES緩沖系統，來增加pH緩沖能力。HEPES在pH7.2-7.4之間有很強的緩沖能力，當透氣的培養器皿被拿到二氧化碳培養箱外面的時候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養液中碳酸鹽緩沖系統就會失去效果，這時候HEPES緩沖系統就能繼續保持pH的穩定。 

3、怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件？

   ATCC (American Type Culture Collection) 收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。

數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養和凍存條件，以及相關文獻等資料。

4、二氧化碳培養箱的挑選和使用

   由于動物細胞培養液一般使用碳酸鹽pH緩沖系統，要求培養環境中維持一定濃度的CO2，所以動物細胞的培養一般需要CO2培養箱。

   CO2培養箱采用兩種不同的CO2維持系統。一種方式是通過使用空氣泵，將CO2和空氣按一定比例混合后吹入培養箱。另一種方式是通過一個自動的CO2檢測控制系統，在檢測到CO2濃度低于要求濃度時打開CO2氣閥充入CO2。由于前一種方法耗費CO2而且不容易精確控制CO2濃度，先進的CO2培養箱都采用自動監控系統來維持CO2的濃度。

   配有自動CO2檢測控制系統的培養箱需要根據生產廠家的說明，定期做CO2濃度的測試和矯正。

   CO2培養箱的隔熱采用水套式和氣套式兩種類型。水套式需要用戶在安裝培養箱時培養箱壁的空間內灌入大量蒸餾水。由于水的比熱容很高，水套式的優點是有助于均勻散熱和避免形成冷區，以及在斷電后能夠比較好的減緩培養箱內溫度的降低。它的缺點是由于灌入大量的水，培養箱變得非常沉重，不易搬動。有效的隔熱系統和先進的表面散熱元件的使用使氣套式培養箱兼備了輕便性和水套式培養箱的優點，所以新型的CO2培養箱大多采用氣套式。

   目前大多數實驗室都使用進口的細胞培養箱。雖然進口的產品質量上比較有保障，但價格很貴，而且售后服務不是很方便。國內的細胞培養箱的質量也有了很大的提高，

　　CO2培養箱一般配一個水盤，用以維持很高的濕度。水盤內的水要定期添加，水盤也要定期清洗以避免微生物的生長。

    為了減少微生物的污染，有一些CO2培養箱提供滅菌功能。有的可以加熱到比較高的溫度來滅菌，有的則通過讓空氣循環通過一個紫外線腔體的辦法來滅菌，這樣就滅菌時就不需要中斷細胞的培養。

5、超凈臺的挑選和使用

    為了避免污染，一般的細胞培養需要在超凈臺上進行。用于細胞培養的超凈臺的潔凈度一般為100級，即每立方英尺中大于0.5um的顆粒數量少于100顆，與計算機硬盤的生產環境要求相當。

    在超凈臺內，過濾后的空氣垂直由上到下，或水平由內到外穩定的流動，從而維持一個潔凈的操作環境。根據氣流的方向，超凈臺可分為垂直式層流和水平式層流兩種類型。

 　　在水平式層流型超凈臺內，過濾后的空氣由內到外流動，在操作過程中比垂直式層流型更容易維持一個潔凈的環境，減少污染的機會。但是由于氣流吹向實驗操作者，增加了實驗操作者感染病原體的機會，所以大部分實驗室都采用垂直式層流型的超凈臺。

 　　在普通的垂直式層流型的超凈臺內，過濾后的空氣自上往下流動，通過操作面板前后兩排開孔直接排出。這樣的超凈臺比較便宜，但是不適合病原體相關的實驗操作。相關病原體的操作必須要在生物安全柜內進行。在生物安全柜內，自上而下的過濾后的空氣經過超凈臺，然后再次過濾后，才被排到外面，從而大大減少了病原體擴散的機會。當然生物安全柜比較貴，但考慮到培養的細胞中以及血清中都有可能有病毒等病原體的存在，有條件的實驗室應該盡量使用生物安全柜來進行細胞培養。

 　　超凈臺需要定期檢查，超凈臺的空氣過濾系統也需要定期更換，以保證超凈臺內的潔凈度。空氣過濾系統的更換次數可以詢問生產廠家。如果有潔凈度檢測設備的話，可以非常迅速的檢驗超凈臺的潔凈度。如果懷疑細胞培養過程中的污染是由于超凈臺內潔凈度降低引起的，可以用將一個含微生物培養基的培養皿在超凈臺內敞口放置一段時間，然后在37℃培養的方法來評估。

 　　超凈臺內一般都有紫外線燈用于滅菌。紫外線燈的正確使用方法是在超凈臺使用前打開半小時左右。有的操作人員在不使用超凈臺的時候把紫外線燈一直打開，這樣不但沒有必要，而且會大大縮短紫外線燈的使用壽命。紫外線燈要根據生產廠家的說明定期更換。

    超凈臺使用完之后要先用蒸餾水擦拭，然后再用70%酒精擦拭。直接用70%酒精擦拭濺在臺面上的培養液會在不銹鋼臺面上留下難以去除的污漬。

6、一次性細胞培養皿等標明 “Tissue Culture Treated”是什么意思？

 　　大部分動物細胞需要貼附在一個固相界面上才能生長。而只有親水的固相界面，細胞才能貼附。

 　　最早的細胞培養器皿是由玻璃制作的。由于玻璃的表面是親水的，不經過特殊的處理，普通的細胞就可以貼附生長。

 　　聚苯乙烯透光性能好，具有較好的強度和易塑性，并且沒有毒性，成為一次性細胞培養皿和培養板等一次性細胞培養耗材的首選材料（一般的磁帶和CD盒也是用聚苯乙烯制成的）。然而聚苯乙烯表面是憎水的，所以需要經過表面的改性處理，變成親水后才能適用于細胞培養。

    一次性細胞培養皿等標明“Tissue culture treated”，是表示該器皿經過表面的改性處理，適合貼壁細胞的培養。而懸浮生長的細胞，就不一定需要這樣經過特殊處理過的器皿。 但經過表面的改性處理后的細胞培養皿等一般也適合懸浮細胞的培養。

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